Análise de alterações na expressão de genes relacionados com a imunidade inata em células humanas infectadas com Apeu virus

A família Bunyaviridae consiste em uma das maiores e mais diversificadas famílias de vírus de RNA, contendo cerca de 350 vírus sorologicamente distintos. O Apeu virus (APEUV) é um vírus da família Bunyaviridae que se destaca por seu grande potencial emergente. Isolado pela primeira no Brasil, este vírus pode causar uma doença que apresenta sintomas semelhantes aos da gripe, como febre alta, dor de cabeça e mialgia, associadas geralmente a náuseas, vômitos, fraqueza e fotofobia. Entretanto, apesar de seu potencial patogênico, pouco se sabe sobre a sua interação com o sistema imunológico humano. Com o objetivo de estudar alguns aspectos da resposta imune, principalmente a reposta inata desencadeada pela infecção do APEUV, a expressão de 19 genes (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, MyD88,IRF3, IRF5, IRF7, IRF9, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TICAM1, JUN, ROBO-3(RIG-1),IFIH1(MDA-5), IFNα, IFNβ, IFNy) foi analisada. Para tal, foram feitos ensaios de qPCR baseados na metodologia TaqMan®, utilizando cDNA obtido a partir de RNA total extraído de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e de células A549 (linhagem derivada de carcinoma pulmonar humano), infectadas ou não com APEUV por períodos de 4 ou 8 horas.

Como controles, foram utilizadas células infectadas com o vírus da estomatite vesicular (VSV) como controle positivo de uma infecção por vírus de RNA fita simples, e células tratadas com o mock das amostras de vírus como controle negativo. Os dados obtidos foram analisados em software específico. Nossos resultados indicam que PBMC infectadas com APEUV por 4horas (m.o.i.=1 e m.o.i.=3) induzem um aumento na expressão de TLR9 e IFNβ. Quando quantificada a expressão de genes em células A549 infectadas com APEUV(m.o.i.=1 por 4 horas) comparadas com o mock, verificou-se um aumento da expressão dos genes TLR9, IRF3 e IRF7 e no período de 8 horas, também comparando com o mock, verificou-se aumento de forma significativa na expressão de TLR 9, além de um aumento na expressão de TLR3, TLR7, TRAF3 , IRF7 e IFNβ.Verificamos ainda que, após escolher um gene housekeeping através de método estatístico, células A549 infectadas com APEUV em uma m.o.i.=1, tende a aumentara expressão dos genes IFNβ e TICAM-I, fundamentais na indução de um estado celular antiviral. Estudos posteriores são necessários para a determinação dos mecanismos envolvidos na resposta imune inata humana contra o Apeu virus.

Análise de alterações na expressão de genes relacionados com a imunidade inata em células humanas infectadas com Apeu virus / Analysis of changes in the expression of genes related to innate immunity in human cells infected with virus Apeu

A família Bunyaviridae consiste em uma das maiores e mais diversificadas famílias de vírus de RNA, contendo cerca de 350 vírus sorologicamente distintos. O Apeu virus (APEUV) é um vírus da família Bunyaviridae que se destaca por seu grande potencial emergente. Isolado pela primeira no Brasil, este vírus pode causar uma doença que apresenta sintomas semelhantes aos da gripe, como febre alta, dor de cabeça e mialgia, associadas geralmente a náuseas, vômitos, fraqueza e fotofobia. Entretanto, apesar de seu potencial patogênico, pouco se sabe sobre a sua interação com o sistema imunológico humano. Com o objetivo de estudar alguns aspectos da resposta imune, principalmente a reposta inata desencadeada pela infecção do APEUV, a expressão de 19 genes (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, MyD88,IRF3, IRF5, IRF7, IRF9, IRAK4, TRAF3, TRAF6, TICAM1, JUN, ROBO-3(RIG-1),IFIH1(MDA-5), IFNα, IFNβ, IFNy) foi analisada. Para tal, foram feitos ensaios de qPCR baseados na metodologia TaqMan®, utilizando cDNA obtido a partir de RNA total extraído de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e de células A549 (linhagem derivada de carcinoma pulmonar humano), infectadas ou não com APEUV por períodos de 4 ou 8 horas...

Como controles, foram utilizadas células infectadas com o vírus da estomatite vesicular (VSV) como controle positivo de uma infecção por vírus de RNA fita simples, e células tratadas com o mock das amostras de vírus como controle negativo. Os dados obtidos foram analisados em software específico. Nossos resultados indicam que PBMC infectadas com APEUV por 4horas (m.o.i.=1 e m.o.i.=3) induzem um aumento na expressão de TLR9 e IFNβ. Quando quantificada a expressão de genes em células A549 infectadas com APEUV(m.o.i.=1 por 4 horas) comparadas com o mock, verificou-se um aumento da expressão dos genes TLR9, IRF3 e IRF7 e no período de 8 horas, também comparando com o mock, verificou-se aumento de forma significativa na expressão de TLR 9, além de um aumento na expressão de TLR3, TLR7, TRAF3 , IRF7 e IFNβ.Verificamos ainda que, após escolher um gene housekeeping através de método estatístico, células A549 infectadas com APEUV em uma m.o.i.=1, tende a aumentara expressão dos genes IFNβ e TICAM-I, fundamentais na indução de um estado celular antiviral. Estudos posteriores são necessários para a determinação dos mecanismos envolvidos na resposta imune inata humana contra o Apeu virus...

Occurrence of Pacora virus (PAC: Bunyaviridae: Bunyavirus - like) in Brazilian Amazonia: new findings

The Pacora virus (PAC: Bunyaviridae: Bunyavirus - like), was known only through some isolates obtained from mosquitoes (culex dunni) in Panama, and two isolates obtained in the Brasilian Amazon region from the sylvatic birds Phlegopsis nigromaculata and Automolus ochrolaemus. In order to add to the knowledge of the arboviruses' cycles, mosquitoes were colected in the Zoobotanical Park of Macapá (Amapá State), from August, 18th to September, 11th, in areas of rain forest and savannah. The collections were done at both ground and canopy levels in the savannah, with human bait and light traps. 5642 mosquitoes have been collected, of which 5580 (or 184 pools) have been inoculated intracerebrally in newborn mice. Two strains of PAC virus have been isolated from unidentified Culex mosquitoes. This result is the first report of PAC virus in Amapá State. The virus has also been isolated for the first time from mosquitoes in Brazil. Thus, the presence of the complete cycle of sylvatic transmission of this agent is confirmed in Brazilian Amazonia. The ecological data available for the host show that the virus circulates at the lower level in the rain forest (0-5 m) with mostly nocturnal mosquitoes as vectors.

Caracterizaçäo e relacionamento antigênico de três novos Bunyavirus no grupo Anopheles A (Bunyaviridae) dos arbovirus / Characterization and antigenic relationship of three new Bunyavirus in the Anopheles A serogroup (Bunyaviridae) of arboviruses

Säo descritos o isolamento e a caracterizaçäo de três novos arbovirus isolados na regiäo da Usina Hidro-Elétrica de Tucuruí (UHE-TUC). Os três novos arbovirus pertencem ao grupo Anopheles A(ANA), genêro Bunyavirus (família Bunyaviridae). Os vírus Tucuruí (TUC), Caraipí (CPE) e Arumatena (ART) säo relacionados entre si e com o vírus Trombetas (TBT), formando dentro do grupo ANA um complexo chamado Trombetas. Os arbovirus TUC, CPE, e ART foram obtidos a partir de lotes de mosquitos Anopheles (Nyssorhynchus) sp capturados em Tucuruí, nas proximidades da usina hidrelétrica de Tucuruí, Estado do Pará, nos meses de fevereiro, agosto e outubro de 1984, respectivamente. Até o final de 1990 os vírus TUC, CPE e ART foram isolados 12, 32 e 28 vezes respectivamente, sempre na regiäo da UHE-TUC, exceçäo feita ao vírus TUC, do qual se obteve uma amostra procedente de Balbina, onde também foi contruída uma hidroelétrica. Até o presente, esses vírus só foram isolados a partir de mosquitos do grupo An. (Nys) principalmente, a partir de espécies An. (Nys) nuneztovari e An. (Nys) triannulatus também consideradas vetores secundários da malária na Amazônia Brasileira. Testes sorológicos executados com soros humanos e de diversas espécies de animais silvestres foram negativos, com execeçäo de um soro de um carnívoro de espécie Nasua nasua que neutralizou a amostra TUC em títulos de 2.6 índice logarítmico de neutralizaçäo (ILN)

Uso de células de Aedes albopictus C6/36 na propagaçäo e classificaçäo de arbovirus das famílias Togaviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae e Rhabdoviridae / The use of Aedes albopictus C6/36 cells in the propagation and classification of arbovirus of the Togaviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae and Rhabdoviridae families

Colônias de células de mosquito Aedes albopicus C6/36 foram infectadas com 23 arbovirus, sendo 19 destes existentes no Brasil, pertencentes às famílias Togavitidae, Flaviviridae, Bunyaviridae e Rhabdoviridae. A Replicaçäo viral foi detectada por imunofluorescência indireta com todos os vírus estudados enquanto que o efeito citopático foi observado durante a infecçäo por alguns deste. No teste de imunofluorescência indireta utilizou-se fluidos ascíticos imunes de camundongos, especificos para os vírus estudados. A replicaçäo viral caracterizada por grande produçäo de antígeno recomenda a utilizaçäo de células C6/36 na propagaçäo e em tentativas de isolamento desses arbovírus. A técnica de imunofluorescência ofereceu subsídios na classificaçäo e identificaçäo de vírus que replicam nestas células

Survey of ticks (Acarina: Ixodidae) for Crimean haemorrhagic fever virus activity in Jammu & Kashmir state, India.

A survey of ixodid ticks was carried on in 1977 to determine the crimean haemorrhagic fever (CHF) virus activity in Jammu & Kashmir state, India. In all, 412 immatures and 3258 adults belonging to 7 genera and 16 species of ticks were collected as ectoparasites of small and large mammals. These included one species each of the genera Boophilus, Dermacentor and Nosomma, 2 species of Rhipicephalus, 3 species of Ixodes and 4 species each of Haemaphysalis and Hyalomma. Haem. bispinosa was the predominant species followed by B. microplus, Haem. montgomeryi, R. haemaphysaloides and Hyal. m. isaaci. The four Hyalomma species viz., Hyal. a. anatolicum (incriminated as the vector of CHF virus), Hyal. detritum, Hyal. dromedarii and Hyal. m. isaaci were found parasitizing goat, sheep, camel and cattle and were collected in the districts of Jammu, Rajouri, Poonch and Udhampur. Four species viz., Haem. intermedia, Hyal. detritum, Hyal. dromedarii and Hyal. m. isaaci are new records for the state. A total of 138 pools comprising eight species under six genera of ticks were processed for isolating the virus. CHF virus was not isolated. The role of ixodid ticks, particularly those of the genus Hyalomma in the dissemination of CHF virus is highlighted.

Mecanismos de mantenimiento del virus Gamboa en el mosquito Aedeomya squamipennis / Maintenance mechanisms of Gamboa virus in the mosquito Aedeomyia squamipennis

Se examinó la hipótesis de que el mosquito Aedeomyia squamipennis mantenía al virus Gamboa (Bunyavirus) circulando en la naturaleza mediante transmisión transovárica (de la hembra infectada a su prole), sin la necesidad de un huésped amplificador. En estudios iniciados en Marzo de 1985 se procesaron 84,000 mosquitos capturados en el campo. El virus fue aislado de larvas y de pupas, de machos y de hembras. La tasa mínima de infección fue de 1:207. Los huevos de Ad. squamipennis fueron identificados por primera vez en este estudio. Se examinaron 1226 grupos de huevos y la tasa de aislamiento viral fue de 1:77. Las tasas de aislamiento mensuales fueron similares, como también lo fueron las encontradas en las diferentes etapas de evolución del mosquito, sugiriendo que la transmisión transovárica es uno de los mecanismos de mantenimiento del virus Gamboa

Complejo Hughes: algunos aspectos ecológicos / Hughes complex: some ecologic aspects

Se efectúa una revisión del grupo Hughes (HUG), género Nairovirus, familia Bunyaviridae, cuyos vectores son garrapatas del género Ornithodoros (Alectorobius) especies O. (A) capensis, O. (A) maritimus y O. (A) muesebecky. Se informa también el aislamiento de 19 cepas del virus Hughes en Cayo Mono Grande en la provincia de Matanzas. Se expone además que las aves marinas Sterna fuscata, Anous stolidus y Sula leucogaster constituyen los principales hospederos del virus HUG y se analiza el papel de las variantes antigénicas del virus HUG como agentes patógenos potenciales para el hombre y las aves marinas. Finalmente se concluye con la importancia del estudio de las garrapatas en América

Relaciones antigenicas entre virus del complejo Tacaiuma del serogrupo Anopheles A (Bunyaviridae). / Antigenic relations between Tacaiuma complex viruses of the Anopheles A serogroup (Bunyaviridae)

En investigaciones de campo realizadas en forma independiente sobre la ecologia de los arbovirus en Arizona, EUA, y Sao Paulo Brasil, se aislaron dos virus del grupo Anopheles A. El virus aislado en Arizona (743-366), obtenido de mosquitos Anopheles freeborni, para el que se propone el nombre de virus Virgin River y el virus aislado en Sao Paulo (H-32580, obtenido de un ser humano) estaban vinculados serologicamente con el complejo Tacaiuma (TCM). Asimismo, se determino que los virus 743-366 y H-32580 son variantes de un subtipo del TCM (SPAr 2317). Sin embargo, es posible distinguir uno del otro. Se describen las circunstancias en que se hicieron estas observaciones y se resalta su significado en la epidemiologia, la genetica y la nomenclatura de la familia virica Bunyaviridae.

Durante pesquisas de campo não relacionadas sobre a ecologia dos arbovírus no Arizona, Estados Unidos, e em São Paulo, no Brasil, isolaram-se dois vírus dos Anopheles, grupo A. 0 vírus isolado no Arizona (743-366 tirado de mosquitos Anopheles freebornz) para o qual se propóe dar o nome de vírus Virgin River e o vírus isolado em São Paulo (H-32580 tirado de um ser humano), estavam serologicamente relacionados no âmbito do complex Tacaiuma (TCM). Determinou-se também que o 743-366 e o H- 32580 são variantes de um subtipo (SPAr2317) do TCM. Contudo, o 743-366 e o H-32580 diferenciam-se um do outro. Este artigo descreve as circunstancias em que se fueram essas observações e a sua significacão epidemiológica, terminológica e genética em relacão com a família dos Bunyaviridae.